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二氧化碳培養的滅菌方式有多種,以下是幾種常見的滅菌方法:
1、紫外滅菌
通過紫外線燈管發出特定波長(一般主要是 253.7nm 左右)的紫外線,紫外線照射到微生物的 DNA 等遺傳物質上,使其結構被破壞,導致微生物無法正常繁殖、生長進而死亡。可在培養箱內部安裝紫外線燈,在箱內無物品或者定期對空箱進行照射操作,通常照射一段時間(比如 30 分鐘至數小時不等)來實現滅菌效果。不過紫外線的穿透力相對較弱,只能對其直接照射到的物體表面進行滅菌,對于一些存在遮擋、縫隙等部位的滅菌效果有限,且燈管隨著使用時間增長,紫外線強度會逐漸減弱,需要定期更換燈管以保證滅菌效果。
2、過濾除菌
在二氧化碳培養箱進氣和排氣等部位安裝高效空氣過濾器(HEPA 過濾器等),過濾器的濾材能夠攔截、吸附空氣中的微生物、灰塵顆粒等,使得進入培養箱內部的空氣以及排出的氣體都是經過凈化處理的,保證培養箱內部氣體環境相對無菌。不過過濾器需要定期更換,以維持良好的過濾效果,防止隨著使用時間增加,因濾材堵塞、破損等情況而導致除菌效果下降。
3、干熱滅菌
采用6面直接加熱,加熱溫度一般在120℃-180℃。當二氧化碳培養箱用于污染危險區域時,干熱滅菌可作為清潔室內的附加手段。在高溫下保持2小時以上可消滅細菌,但整個過程時間長,且干熱140℃時仍可能存在滅菌不干凈的情況,部分芽孢和孢子可能無法滅活。
4、濕熱滅菌
溫度超過100℃后水轉變為水蒸汽并產生高壓強,對微生物進行高壓及穿透性導熱滅菌。但二氧化碳培養箱通常采用90℃濕熱滅菌,因溫度過低,無法達到理想的滅菌效果,對芽孢、孢子等耐高溫類污染無效。
5、高壓滅菌法
通過將二氧化碳培養箱置于密閉容器中加壓至一定壓力(如120~130磅/英寸2),并持續一定時間(如20分鐘以上)來實現滅菌效果。高壓下產生的溫度和壓力可摧毀幾乎所有微生物及其孢子形式。然而,由于二氧化碳培養箱的結構和材質限制,高壓滅菌法通常不適用于該設備的滅菌。
6、化學滅菌
(1)液體消毒劑:選擇對二氧化碳培養箱無腐蝕性的液體消毒液,如含氯消毒劑、過氧化物類消毒劑、醛類消毒劑、醇類消毒劑等,對物體表面進行快速消毒,屬于表層殺菌,效率高、時間短、操作便捷,但消毒不干凈的話,并且對人體有害,有腐蝕性,無法殺死病菌或者細菌芽孢。
(2)甲醛熏蒸:通過將一定濃度的甲醛溶液噴灑或霧化到二氧化碳培養箱內部,達到殺滅微生物的目的。甲醛能與蛋白質分子共價結合形成穩定的交聯結構,從而導致微生物死亡。該措施尤其適用于殺死空氣傳播的病原體。然而,甲醛具有刺激性氣味和毒性,使用時需要嚴格控制濃度和作用時間,并確保充分通風。
(3)環氧乙烷熏蒸:環氧乙烷是一種廣譜殺菌劑,能夠穿透微生物細胞膜并干擾其代謝過程,從而殺滅細菌、真菌和病毒等多種類型的微生物。這種滅菌方式效果明顯,但操作過程較為復雜,且環氧乙烷具有毒性,需要在專業人員的指導下進行。
(4)過氧化氫蒸汽滅菌:將過氧化氫氣體與水混合后產生蒸汽,然后將其導入二氧化碳培養箱中進行滅菌處理。過氧化氫分解產生氧氣和水,同時釋放大量活性氧自由基,這些物質能夠有效地破壞細胞壁和DNA結構,從而達到滅菌目的。
為了達到更好的滅菌效果,有時可以采用聯合殺菌法,即同時使用多種滅菌方式。例如,可以先用紫外線照射或液體消毒劑進行初步滅菌,然后再用環氧乙烷或過氧化氫蒸汽進行深度滅菌。這種方式可以彌補單一滅菌方式的不足,提高滅菌效果。選擇哪種滅菌方式取決于具體的滅菌需求和設備條件。在使用任何滅菌方式之前,都需要仔細閱讀設備說明書并咨詢專業人員的意見。